非洲豬瘟快速診斷試劑盒非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒

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【獸(shou) 藥名稱】

　　通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒

　　商品名稱：無

　　漢語拚音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe

　　英文名稱：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus

　　【主要成分與(yu) 含量】

　　【作用與(yu) 用途】本試劑盒適用於(yu) 豬血液、豬肉組織、淋巴結樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

　　【用法與(yu) 判定】

　　1 用法

　　1.1 樣品處理及模板準備

　　1.1.1 樣品處理

　　·組織樣品處理：分別從(cong) 豬肉組織、淋巴結不同位置取樣，用手術剪剪碎混勻後取0.1g於(yu) 研磨器中研磨，加入1.5ml生理鹽水繼續研磨，待勻漿後轉至1.5ml無菌離心管，12000 r/min離心2分鍾，取上清200μl備用。

　　·血液樣品無需處理，取200μl備用。

　　1.1.2 模板準備

　　·根據不同的樣本類型，按照下表準備相應的樣本用量。

　　·將樣本加入到1.5 ml離心管中，加入下表推薦體(ti) 積的Solution A，渦旋震蕩20 s，並按照下表推薦的處理方法，室溫靜置3-5 min，或95℃金屬浴振蕩孵育3-5 min。

　　·樣本充分裂解後（95℃金屬浴振蕩孵育的樣本需恢複室溫），加入下表推薦體(ti) 積的Solution B，並渦旋震蕩30 s，12000rpm離心2min，上清即為(wei) 模板DNA。

　　·處理後的樣本如在2小時內(nei) 進行下一步試驗，請於(yu) 4℃保存，如不能立即進行下一步試驗，請於(yu) -20℃保存。

　　備注：組織樣本加入10倍體(ti) 積的生理鹽水製成組織勻漿液後，可按照血液樣本的處理方法進行處理。

　　1.1.3可利用商品化試劑盒提取核酸進行反應，效果更佳

　　1.2 熒光PCR擴增

　　1.2.1 試劑準備

　　實驗前20分鍾將試劑從(cong) 冰箱取出並恢複至室溫，使其*融化，充分混勻後瞬時離心去除管壁吸附液體(ti) 。

　　1.2.2 配製反應體(ti) 係

　　按下表1體(ti) 係，在配套PCR管中配製反應體(ti) 係，蓋緊管蓋後瞬時離心10秒，轉移至擴增區。

　　表1  PCR反應體(ti) 係

　　1.2.3 PCR擴增

　　快速模式

　　表2 儀(yi) 器PCR擴增參數

2 判定

　　2.1 合理調整閾值線，不同儀(yi) 器可根據儀(yi) 器噪音情況進行調整。

　　2.2 試劑盒有效性判定

　　·陰性對照：無Ct值，線形為(wei) 直線或微斜，無明顯指數增長。

　　·陽性對照：Ct值≤30，有明顯指數增長，呈典型的S型曲線。

　　2.3 樣本結果判定

　　·樣本檢測結果Ct值≤38，有明顯指數增長，判定為(wei) 陽性，表明樣本中檢測出非洲豬瘟病毒。

　　·樣本檢測結果38＜Ct≤40，判定為(wei) 可疑。應對樣本進行複測，若複測結果Ct值仍在38~40之間，有明顯指數增長，則判定為(wei) 陽性，否則為(wei) 陰性。

　　·樣本檢測結果無Ct值，判定為(wei) 陰性，表明樣本中未檢測出非洲豬瘟病毒。

　　【注意事項】

　　（1）實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書(shu) ，嚴(yan) 格按步驟執行，不使用本試劑盒提供的組份或不按照說明書(shu) 進行實驗可能導致錯誤結果。

　　（2）所有試劑應在規定溫度儲(chu) 存。-20℃保存的試劑在使用前應充分混勻。試劑盒反複凍融次數不宜超過5次。

　　（3）實驗操作應按照國家有關(guan) 臨(lin) 床基因擴增實驗室管理規範執行，實驗過程應分區（試劑準備區、樣本製備區、核酸擴增區），各區物品為(wei) ，不得交叉使用，避免汙染。

　　（4）操作台、移液器、離心機等儀(yi) 器用品應經常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應進行無酶處理。

　　（5）待檢樣本、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳(chuan) 染性物質處理方法進行處理。

　　（6）為(wei) 防止熒光幹擾，應避免使用含熒光物質的手套，避免用手直接接觸，預防交叉汙染。

　　（7）檢測結果為(wei) 陰性，並不*代表為(wei) 非感染狀態，具體(ti) 診斷需結合獸(shou) 醫臨(lin) 床。

　　（8）產(chan) 生假陰性的可能原因為(wei) ：待檢樣本在采集、運輸、保存及核酸提取過程中操作不當造成DNA降解；樣本中核酸濃度低於(yu) z低檢測限；病毒待測靶基因出現變異；未經驗證的其他幹擾因素。

　　（9）產(chan) 生假陽性的可能原因為(wei) ：待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發生交叉汙染。

　　【規格】 50反應/盒

　　【貯藏及有效期】 試劑盒-20℃以下冷凍避光保存，有效期為(wei) 12個(ge) 月。