非洲豬瘟檢測試劑盒備案-風途為您供應非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒

更新時間：2021-01-27 點擊次數：2534

　　非洲豬瘟檢測試劑盒備案-風途為(wei) 您供應非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒（FT-FWSJ）。非洲豬瘟檢測試劑盒為(wei) 認定的非洲豬瘟檢測試劑。

　　近日,農(nong) 業(ye) 農(nong) 村部發布第254號公告,公告顯示,中國農(nong) 業(ye) 大學、北京維德維康生物技術有限公司、北京明日達科技發展有限責任公司研製的非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒和鄭州中道生物技術有限公司、中國農(nong) 業(ye) 科學院北京畜牧獸(shou) 醫研究所、廣東(dong) 省農(nong) 業(ye) 科學院動物衛生研究所、武漢華騰濟康生物科技有限公司、申聯生物醫藥(上海)股份有限公司、深圳市康百得生物科技有限公司研製的非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒符合獸(shou) 藥產(chan) 品要求,獲得農(nong) 業(ye) 農(nong) 村部批準。風途為(wei) 您提供的就是鄭州中島生物技術有限公司的產(chan) 品。

【產(chan) 品名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）

英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［預期用途］

本試劑盒主要用於(yu) 檢測疑似感染豬抗凝血及臨(lin) 床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever

Virus）核酸，適用於(yu) 非洲豬瘟病毒的檢測、輔助診斷和流行病學調查。

【試劑盒組分】

1、試劑盒組成及貯藏條件

名稱	50 T	貯藏條件
1、反應液A	ImL	-20°C
2、反應液B	ImL
3、陽性對照	250μL
4、陰性對照	250μL
5、PCR反應液	850μL
6、酶混合液	150μL

2、需自備材料：生理鹽水、無菌槍頭、熒光PCR反應管、記號筆等。

【操作步驟】

一、樣品製備

1、血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為(wei) EDTA）或血清樣品，編號備用。

2、組織樣品：采集脾髒、肝髒、淋巴結、扁桃體(ti) 等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大小），眼科剪剪碎於(yu) 組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鍾離心2分鍾，取上清液於(yu) 滅菌離心管中，編號備用。

二、DNA提取

取反應液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫（20°C左右）靜置3分鍾，加入反應液B 20μL,吹打混勻即可，若為(wei) 抗凝全血，則需8000rpm/分鍾再離心2分鍾後做為(wei) 待檢DNA溶液。

二、PCR擴增

1、配液：取出PCR反應液、酶混合液，在室溫*融化後，充分混勻，瞬離，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應液中，充分混勻，瞬離後按每份20μL分裝使用；或按照每份PCR反應液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗用量，混合兩(liang) 種反應液,瞬離後按照每份20μL分裝到熒光PCR 反應管中，剩餘(yu) 試劑立即凍存；（操作過程要注意避光）

2、加樣擴增：分別向上述PCR反應管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照，混勻並瞬離, 放入熒光PCR儀(yi) 上運行以下程序：

步驟	條件	循環數
UNG處理	50°C： 2分鍾	1
預變性	95°C： 3分鍾	1
預擴増	95°C： 8 秒 55C： 8 秒	5
PCR擴增	95°C： 8 秒 55°C： 8 秒	40

　　熒光通道選擇FAM,在40循環階段每個(ge) 循壞的55°C時收集熒光信號。設置擴增體(ti) 係為(wei) 25μL,同時要選擇 passive reference 和 quencher 為(wei) none 的模式。

　　(注:若熒光PCR儀(yi) (如ABI7500)按說明書(shu) 中的反應程序設置後因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為(wei) 95°C： 5秒 55°C：30秒。)