非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒有多少種規格

非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒有多少種規格，不同的規格之間各有什麽(me) 樣的性能差異，其在實際應用的場景下檢測效果怎樣，由競道告訴你。

　　據悉，2018年起，農(nong) 業(ye) 農(nong) 村部在全國範圍內(nei) 開展生豬屠宰標準化創建活動。根據安徽省生豬屠宰標準化建設的意見，安徽省各地將立足現狀，以改擴建為(wei) 主，每個(ge) 縣(市、區)可建設1家符合《生豬定點屠宰廠(場)資質等要求》規定的3*及以上標準生豬定點屠宰廠(場)，年出欄超過30萬(wan) 頭的縣(市、區)可依據產(chan) 業(ye) 化發展的需要增設1家。對目前鄉(xiang) 鎮設點較多的縣(市、區)，通過壓點升、整合資源，推進縣生豬定點屠宰廠(場)與(yu) 現有鄉(xiang) 鎮屠宰點的重組。

　　【產(chan) 品名稱】

　　通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒(PCR熒光探針法)

　　英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus (PCR Fluorescence Probing)

　　[預期用途]

　　本試劑盒主要用於(yu) 檢測疑似感染豬抗凝血及臨(lin) 床病料中的非洲豬瘟病毒(ASFV, African Swine Fever

　　Virus)核酸，適用於(yu) 非洲豬瘟病毒的檢測、輔助診斷和流行病學調查。

　　【試劑盒組分】

　　1、試劑盒組成及貯藏條件

　　名稱50 T貯藏條件

　　1、反應液AImL-20°C

　　2、反應液BImL

　　3、陽性對照250μL

　　4、陰性對照250μL

　　5、PCR反應液850μL

　　6、酶混合液150μL

　　2、需自備材料：生理鹽水、無菌槍頭、熒光PCR反應管、記號筆等。

　　【操作步驟】

　　一、樣品製備

　　1、 血液樣品：采集抗凝血(抗凝劑為(wei) EDTA)或血清樣品，編號備用。

　　2、 組織樣品：采集脾髒、肝髒、淋巴結、扁桃體(ti) 等病變組織樣品或軟蜱0.1g(黃豆粒大小)，眼科剪剪碎於(yu) 組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鍾離心2分鍾，取上清液於(yu) 滅菌離心管中，編號備用。

　　二、DNA提取

　　取反應液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫(20°C左右)靜置3分鍾，加入反應液B 20μL,吹打混勻即可，若為(wei) 抗凝全血，則需8000rpm/分鍾再離心2分鍾後做為(wei) 待檢DNA溶液。

　　二、PCR擴增

　　1、配液：取出PCR反應液、酶混合液，在室溫*融化後，充分混勻，瞬離，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應液中，充分混勻，瞬離後按每份20μL分裝使用;或按照每份PCR反應液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗用量，混合兩(liang) 種反應液,瞬離後按照每份20μL分裝到熒光PCR 反應管中，剩餘(yu) 試劑立即凍存;(操作過程要注意避光)

　　2、加樣擴增：分別向上述PCR反應管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照，混勻並瞬離, 放入熒光PCR儀(yi) 上運行以下程序：

　　步驟條件循環數

　　UNG處理50°C： 2分鍾1

　　預變性95°C： 3分鍾1

　　預擴増95°C： 8 秒 55C： 8 秒5

　　PCR擴增95°C： 8 秒 55°C： 8 秒40

　　熒光通道選擇FAM,在40循環階段每個(ge) 循壞的55°C時收集熒光信號。設置擴增體(ti) 係為(wei) 25μL,同時要選擇 passive reference 和 quencher 為(wei) none 的模式。

　　(注:若熒光PCR儀(yi) (如ABI7500)按說明書(shu) 中的反應程序設置後因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為(wei) 95°C： 5秒 55°C：30秒。)

　　【結果判定】

　　1、 基線和閾值設定;基線調整取6-15個(ge) 循環的熒光信號，閾值設定以閾值線剛好超過陰性對照檢測 熒光曲線的點為(wei) 原則。

　　2、 質量控製：反應結束後，陰性對照的檢測結果應無特定的擴增曲線，Ct值為(wei) >38或無;陽性對照 的Ct值應≤30.0,且明顯的擴增曲線;否則實驗視為(wei) 無效。

　　3、 樣品判定：待檢樣品熒光信號有指數型增加，且結果顯示Ct值<35.0,報告為(wei) 陽性;未檢測到Ct 值或Ct值>38或無明顯擴增曲線，則樣品判定為(wei) 陰性。35≤Ct值≤8時，複檢一次，重複結果為(wei) 陽性者判定為(wei) 陽性，否則判定為(wei) 陰性。

　　【注意事項】

　　1、實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書(shu) ，嚴(yan) 格按照操作步驟執行，在操作過程中對時間、試劑體(ti) 積等精 確控製可以獲得的結果。

　　2、 實驗室應嚴(yan) 格按照有關(guan) 規定分區管理。各區間人員、器材、試劑及空氣流向應有產(chan) 格要求。

　　3、 有關(guan) 耗材確保潔淨、無菌，核酸提取完成後盡快進入下一步試驗或冷凍保存。

　　4、預混後的試劑應盡量在短期內(nei) 使用完畢，戶外使用應在加冰袋的泡沫盒保存，每日試驗完畢應及時 冷凍保存。

　　5、 對於(yu) 熒光PCR管要避免徒手或使用過的手套接觸，檢測過程中使用不帶熒光物質一次性乳膠手套。

　　6、 凍存試劑使用前應於(yu) 室溫下*融化，充分混勻，瞬時離心使液體(ti) *沉於(yu) 管底。

　　7、 樣品、陰性對照封蓋後，在通風環境添加陽性對照並及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等假陽性汙染。

　　8、 擴增反應完畢後的PCR管嚴(yan) 禁開蓋,應和試驗產(chan) 生的其它廢棄物一起及時收集,遠離PCR實驗室 進行無害化處理。

　　【規格】50頭份/盒。

　　【貯藏與(yu) 有效期】-20°C以下避光保存，有效期12個(ge) 月。