非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒產品介紹

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豬瘟病毒的發病機製：這種病毒的抵抗能力較強，對於(yu) 感染豬瘟病毒的豬隻來講，能夠直接引起高熱稽留、皮膚和黏膜變色、運動失調、昏睡和痙攣、扁桃體(ti) 潰爛以及黏膜的損傷(shang) 等等。一般豬瘟病毒會(hui) 分為(wei) 多種，急性豬瘟病毒的病死率幾乎能夠達到100，尤其在豬群感染的初期，由於(yu) 豬瘟病毒的抗原逐漸從(cong) 單個(ge) 或者團細胞中出現，並且開始發展到全部的機製細胞內(nei) 。所以，在豬瘟病毒侵入到皮膚的生發層、舌的中間層和涎腺、扁桃體(ti) 一個(ge) 身體(ti) 的各個(ge) 細胞組織之中後，能夠直接在晚期的發病中，推動其皮膚內(nei) 出現出血變色的情況、同時還伴隨著粒細胞的增多、神經係統的紊亂(luan) 症狀。

【獸(shou) 藥名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒

漢語拚音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe

英文名稱：African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit

商品名稱：無

【主要成分與(yu) 含量】試劑盒中含有如下組分:

【主要成分與(yu) 含量】試劑盒中含有如下組分:

【用法與(yu) 判定】

1 用法

1.1待檢樣品釆集、保存及運輸

1.1.1樣品釆集

(1) 活豬樣品 無菌采集抗凝血或血清5mL

(2) 病死豬剖檢樣品或屠宰場剖檢樣品 無菌采集死豬的牌、肺、腎、扁桃體(ti) 、淋巴結、肌肉等組織樣品。2〜8°C低溫運至實驗室用於(yu) 檢測。

(3) 病豬汙染的周邊環境 采集與(yu) 病豬相關(guan) 場所的糞便、飼料、汙水樣品。2〜8°C低溫運至實驗室用於(yu) 檢測。

1.1.2樣品保存 采集的樣品在2〜8°C保存應不超過24小時，-70°C條件下保存，避免反複凍 融。

1.1.3樣品運輸泡沫箱加冰袋後密封進行運輸。包裝和運輸應符合農(nong) 業(ye) 農(nong) 村部《高致病性動 物病原微生物菌(毒)種或者樣品運輸包裝規範》和交通運輸部門關(guan) 於(yu) 危險品運輸管理的有關(guan) 規定。

1.2樣品處理

1.2.1血液樣品處理 抗凝血樣品置於(yu) 離心管中，8000 r/min離心2分鍾取上層血漿，編號待 檢。非抗凝血樣品置於(yu) 離心管中，待凝固後，8000 r/min離心2分鍾取200μL上層血清，編號待檢。

1.2.2組織樣品處理取適量脾髒、肝髒、淋巴結、扁桃體(ti) 、肌肉等組織，置於(yu) 研磨器或研磨管中研磨，再加適量生理鹽水混勻，製成約10%的組織勻漿，8000 r/min離心2分鍾，取200μL上 清於(yu) RNase/DNase-free無菌離心管中，編號備用。

1.2.3環境樣品處理

1.2.3.1糞便、飼料樣品處理方法取適量的糞便、飼料放入盛有PBS緩衝(chong) 液的研磨管中研磨混勻，製成約10%的勻漿液.8000 r/min離心2分鍾，取200μL上清於(yu) RNase/DNase-free無菌離心 管中，編號備用。

1.2.3.2汙水樣品處理方法 直接取200μL汙水進行核酸提取。

1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進行DNA核酸提取。

1.4熒光PCR反應：

1.4.1從(cong) 試劑盒中取出熒光PCR反應液、酶混合液，室溫融化後，2000 r/min離心5秒。設被 檢樣品、陽性對照和陰性對照總和為(wei) n,則反應體(ti) 係配製如下：

試劑 體(ti) 係

PCR 反應液 17× (n+1) μL

酶混合液 3× (n+1) μL

1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml離心管中加入上述試劑，充分混勻後瞬時離心。按照20μL/ 管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應管。

1.4.3在上述製備好的熒光PCR反應管中分別加入陰性對照、陽性對照各5μL、處理好的待測核酸各5μL,終體(ti) 積25μL/管，蓋好熒光PCR反應管蓋，混勻後瞬時離心，轉移到熒光PCR儀(yi) 器 上。

144將PCR反應管放置在熒光PCR儀(yi) 樣品槽中，在熒光PCR儀(yi) 上運行以下程序：

熒光通道選擇FAM,在PCR擴增階段每個(ge) 循環的55℃時采集熒光信號。設置擴增體(ti) 係為(wei) 25μL, 同時要選擇passive reference和quencher為(wei) none的模式。(注：若熒光PCR儀(yi) (如AB17500)按說明 書(shu) 中的反應程序設置後因持溫時間短無法運行，可將預擴增和PCR擴增條件變更為(wei) 95C： 5秒 55°C： 30 秒)

2結果判定

2.1試驗有效性判定

陽性對照有典型擴增曲線且Ct值≤30.且陰性對照無Cl值或無擴增曲線，線形為(wei) 直線或輕微斜線，無指數增長期。則判試驗結果有效。否則，此次試驗視為(wei) 無效。

2.2樣品判定

2.2.1陽性：樣本檢測結果Ct值≤35且有明顯指數增長期，判定檢出非洲豬瘟病毒核酸。

2.2.2可疑：樣本檢測結果Ct值在35〜38範圍內(nei) 。此時應對樣本進行重複檢測，如果重複實驗 結果Ct值仍在35〜38範圍內(nei) ，有明顯指數增長期.則判定為(wei) 陽性，否則為(wei) 陰性。

2.2.3陰性：樣本檢測結果Ct值>38或無Ct值，判定未檢出非洲豬瘟病毒核酸。

【注意事項】(1)實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書(shu) ，嚴(yan) 格按照操作步驟執行，在操作過 程中對時間、試劑體(ti) 積等控製可以獲得好的結果。

(2) 實驗室應嚴(yan) 格按照有關(guan) 規定分區管理，依照配液區-模板提取區-擴增區-分析區順序 進行基因檢測。各區間人員、器材、試劑及空氣流向應有嚴(yan) 格要求。

(3) 核酸提取有關(guan) 耗村確保潔淨、無DNase/RNase,提取過程盡量低溫、快速，完成後進入 下一步實驗或凍保。

(4) 對於(yu) 頂部采光儀(yi) 器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋，對於(yu) 底部采光儀(yi)

器要避免徒手或使用過的手套接觸熒光PCR管底，檢測過程中使用不帶熒光物質一次性乳膠手套。

(5) 凍存試劑使用前應於(yu) 室溫下*融化，瞬時離心使液體(ti) *沉於(yu) 管底。避免反複凍融， 以免影響試劑性能。

(6) 樣品、陽性對照等在使用後及時封蓋，.避免組分間及氣溶膠等的汙染造成假陽性。

(7) 擴增產(chan) 物禁止開蓋，實驗產(chan) 生的廢棄物應及時收集，遠離PCR實驗室進行無害化處理。

【規格】50頭份/盒

【貯藏與(yu) 有效期】試劑盒置-20°C以下避光保存，有效期12個(ge) 月。